火球菌 Pyrococcus furious 瓣状核酸内切酶1的表达纯化及酶学特征

目的 克隆表达和纯化火球菌 Pyrococcus furious 来源的瓣状核酸内切酶1基因 pFEN1 （PF1414），对该蛋白的活性和酶学特征进行鉴定和分析。 方法 将 pFEN1 在大肠杆菌中进行重组表达，经亲和层析纯化得到电泳纯蛋白；利用人工合成的荧光标记的寡核苷酸片段作为底物，用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定pFEN1在体外的酶学特性以及与其他蛋白的相互作用。 结果 pFEN1重组蛋白能在大肠杆菌中进行高效表达；高于100 mmol/L的NaCl会抑制pFEN1的活性；pFEN1的核酸酶活性依赖于金属离子Mg 2+ 或Mn 2+ ，且Mn 2+ 的催化效率优于Mg 2+ ；来自嗜热古菌的pFEN1是一种耐高温蛋白，最适反应温度为60-65℃；增殖细胞核抗原（PCNA）能促进pFEN1的内切酶活性。 结论 本研究证实pFEN1是一种Mg 2+ 或Mn 2+ 依赖的核酸内切酶，且PCNA能促进该酶的活性。