脾酪氨酸激酶参与酿酒酵母甘露聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)的表达

为了探索脾酪氨酸激酶（Syk）是否参与酿酒酵母甘露聚糖（S.c M）诱导绵羊瘤胃上皮细胞（ORECs）β-防御素-1（SBD-1）表达的过程，首先利用免疫组化、RT-PCR和免疫荧光等方法检测Syk在ORECs内的表达情况；然后采用qPCR和Western blot方法检测S.c M刺激ORECs后Syk的表达变化，同时用Western blot方法检测Syk的磷酸化水平；接着用3条Syk特异性siRNAs（#1、#2和#3）转染ORECs 24 h后，qPCR检测Syk mRNA的表达变化，筛选出干扰效果最佳的Syk siRNA；最后用效果最佳的siRNA和Syk特异性抑制剂R406分别处理ORECs后，采用qPCR和ELISA检测SBD-1的表达变化，以确定Syk在S.c M诱导SBD-1表达过程中的作用。结果显示：Syk在ORECs内表达；且S.c M刺激ORECs后Syk的mRNA和蛋白表达水平显著高于未刺激组（P < 0.01或P < 0.05），S.c M刺激ORECs不同时间（5、15、30、45和60 min）均能使Syk发生磷酸化，且刺激15 min后磷酸化水平达到最大（P < 0.01）；此外，Syk的3条特异性siRNAs转染ORECs后Syk的表达均降低，且Syk siRNA#2的抑制效果最明显（P < 0.01）；同时Syk siRNA#2和R406均能极显著降低S.c M诱导ORECs SBD-1的表达（P < 0.01）。上述结果表明，Syk参与S.c M诱导ORECs SBD-1的表达。