Optimized expression of dual reporter genes in transient transfection of purified Toxoplasma gondii using different promoters.

Fluorescent protein and luciferase genes are valuable reporter genes and have been widely used for noninvasive monitoring of gene expression in living tissues and cells. We tested expression of the dual reporter genes in transient trans- fection of purified Toxoplasma gondii tachyzoites. Two copies of the enhanced yellow fluorescent protein (EYFP) gene were put under the control of 3 representative T. gondii promoters (GRA1, SAG1, and DHFR). Fluorescence from each EYFP reporter was significantly higher than that from a green fluorescent protein (GFP) reporter. The GRA1-EYFP reporter gave the highest fluorescence. Although both fluorescence and luciferase were expressed in the dual reporter system, the lu- ciferase reporter was more efficient than either the EYFP or GFP reporters, and it required fewer parasites to be successfully used. Resume : Les genes qui codent la proteine fluorescente et la luciferase sont des genes rapporteurs utiles et ils ont ete large- ment utilises pour suivre de facon non invasive l'expression genique dans les tissus et les cellules vivants. Nous avons teste l'expression de genes rapporteurs doubles lors de transfections transitoires de tachyzoites purifies de Toxoplasma gondii. Deux copies du gene codant la proteine fluorescente EYFP ont ete placees sous le controle de trois promoteurs representa- tifs de T. gondii (GRA1, SAG1 et DHFR). La fluorescence produite par chaque rapporteur EYFP etait significativement plus elevee que celle d'un rapporteur GFP. Le rapporteur GRA1-EYFP produisait la fluorescence la plus forte. Meme si la fluorescence et la luciferase etaient toutes deux exprimees dans le systeme de rapporteur double, le rapporteur luciferase etait plus efficace que les rapporteurs EYFP et GFP, et necessitait moins de parasites pour etre utilise avec succes. Mots-cles : Toxoplasma gondii, transfection, luciferase, tri cellulaire par fluorescence, proteine fluorescente, gene rapporteur double. (Traduit par la Redaction)