Egy-sejt PCR beállítása sertésen preimplantációs genetikai diagnózis céljából

Az utobbi evtizedben az uj reprodukcios technikak fejlesztesenek es alkalmazasanak hatasara jelentősen megemelkedett a sertes agazat termelekenysege. A preimplantacios genetikai diagnozis (PGD) es embriotranszfer segitsegevel meghatarozott ivaru utodokbol allo almok allithatok elő. Az embriokon vegzett biopszia reven kinyert sejtek ivaranak meghatarozasa utan a kivant nemű embriok ultethetők recipiens allatokba. Kiserleteinkben egy sertes PGD modszert kivantunk kifejleszteni in vitro letrehozott embriokbol embriobiopsziaval kinyert sejteken. Munkank soran az ivarspecifikus PCR-hez pozitiv kontrollkent a mindket nemre jellemző sertes mitokondrialis 12S rRNS genszekvenciat valasztottuk, mig az Y kromoszoma kimutatasara a sertes him-specifikus ismetlődő szekvenciat alkalmaztuk a duplex PCR soran. Vagohidrol szarmazo petefeszkekből kinyert petesejteket hasznaltunk a PCR beallitasahoz, hogy elerjuk az embrio ivaranak meghatarozashoz szukseges detektalasi erzekenyseget (6pg/µl DNS). A keletkezett PCR termekek 2%-os agaroz gelen futtatva jol elkulonithetőek: nősteny eseteben egy, himek eseteben ket sav detektalhato. A sikeres beallitast kovetően a PGD modszerekent in vitro fertilizacioval előallitott 8-sejtes embriokat biopsziaztunk es egy-sejt PCR segitsegevel megallapitottuk a nemuket.