PO8 Une nouvelle méthode non invasive pour l’étude à long terme des cellules β-pancréatiques et des îlots entiers – Enregistrement extracellulaire de l’activité électrique sur micro-electrode arrays

Introduction Les cellules β reagissent aux variations de concentrations de glucose et d’hormones ambiants par des oscillations de leur potentiel de membrane necessaires a la secretion pulsatile des quantites adaptees d’insuline. L’enregistrement de cette activite electrique de maniere non invasive par micro-electrode array (MEA) serait particulierement utile pour etudier leur comportement a long terme. Contrairement aux neurones, les cellules β n’ont jamais ete etudiees par cette technique, leurs signaux electriques etant de faible amplitude. Nous avons donc d’abord etudie la faisabilite de cette approche sur ces cellules, puis nous avons utilise cette technique pour etudier l’interdependance entre les voies de signalisation Ca 2+ - et AMPc-dependantes. Materiels et Methodes Des cellules β clonales INS-1E et des cellules d’ilots de Langerhans de souris ont ete cultivees pendant 5-7 jours sur des MEA a 64 canaux. Les variations de [Ca 2+ ]i ont ete mesurees sur cellule unique avec la sonde INDO-1. Resultats Nous avons mis au point pour la premiere fois la culture et l’enregistrement electrophysiologique de cellules β clonales INS-1E sur MEA. En reponse au glucose, la frequence de decharge de ces cellules augmente de maniere significative, reproductible sur plusieurs heures et dose-dependante. Ces reponses sont supprimees par le diazoxide et potentialisees par la forskoline et le GLP-1. De plus, des potentiels d’action generes par des cellules primaires d’ilots de souris ont pu etre enregistres sur MEA. Enfin cette approche, en association avec des techniques d’imagerie calcique, a ete utilisee pour etudier, au moyen d’agents pharmacologiques et de knock-down , l’interdependance entre les voies Ca 2+ - et AMPc-dependantes. Nos resultats preliminaires indiquent une interdependance etroite entre ces voies, ce qui pourrait etre determinant au niveau du couplage stimulus-secretion dans les conditions normales et pathologiques. Conclusion Nos resultats montrent la faisabilite des enregistrements electriques des cellules β a long terme et de maniere non invasive sur MEA, ainsi que leur application a l’exemple de l’etude de l’interdependance des voies de signalisation.