感染突变Cav-1基因的人胚肾293T细胞eNOS蛋白、NO表达变化

目的：观察感染突变窖蛋白-1（Cav-1）基因的人胚肾293T细胞中一氧化氮合酶（eNOS）蛋白及一氧化氮（NO）表达变化。方法采用PCR法扩增突变型Cav-1（F92A-Cav-1）基因，插入慢病毒载体pLVX-mCMV-mCherry。重组质粒转化，对阳性克隆进行测序和酶切鉴定，F92A-Cav-1成功克隆于慢病毒载体，将构建成功的重组质粒pLVX-F92A-Cav-1-mCMV-mCherry命名为LV-F92A-Cav-1；将293T细胞随机分为正常对照组、阴性对照组（空载体组）和LV-F92A-Cav-1组。正常对照组不转染，空载体组转染空载体，LV-F92A-Cav-1组转染LV-F92A-Cav-1。分别采用免疫荧光及NO荧光探针观察感染LV-F92A-Cav-1质粒的293T细胞中eNOS蛋白及NO表达，CCK-8法观察感染LV-F92A-Cav-1的293T细胞活性。结果与正常对照组及空载体组相比，LV-F92A-Cav-1组eNOS蛋白表达及NO生成增多；正常对照组、空载体组、F92A-Cav-1组293T细胞OD值分别为2．233、2．184、2．231，三组间两两比较，P均＞0．05。结论感染突变Cav-1基因的人胚肾293T细胞中eNOS蛋白、NO表达增多。