Expressão do gene otimizado da proteína p26 do vírus da anemia infecciosa equina em Escherichia coli

A Anemia Infecciosa Equina (AIE), considerada uma das viroses mais importantes em equinos no mundo, e causada por um lentivirus da familia Retroviridae. E uma infeccao cronica, sem tratamento, prevalente principalmente em regioes de clima quente e umido, favoravel a transmissao por insetos hematofagos. Segundo o Ministerio da Agricultura e Pecuaria e Abastecimento (MAPA), a restricao do trânsito e abate de animais infectados sao as estrategias para o controle da AIE no Brasil, o que ocasiona perdas na equinocultura. O diagnostico oficial da doenca e realizado pela deteccao de anticorpos circulantes atraves da imunodifusao em gel de Agar (IDGA) e de ELISA. A proteina p26 do virus da AIE e altamente conservada e utilizada na maioria dos testes de diagnostico, uma vez que induz uma forte resposta humoral. O objetivo com este trabalho foi a producao de uma proteina p26 recombinante em Escherichia coli para uso em testes diagnostico sorologico. A sequencia do gene p26 foi otimizada com relacao aos codons preferenciais e ao conteudo GC para uso em E. coli, a fim de maximizar a producao de proteinas, e foi adicionado a sequencia um marcador de seis residuos de histidina (6xHis-tag) para posterior deteccao e purificacao proteica. A sequencia foi sintetizada e clonada a jusante do gene de uma proteina ligante de maltose (MBP2*) no vetor de expressao pMAL-c4X. A inducao genica da E. coli transformada foi realizada com isopropil β-D-tiogalactopiranosideo e a proteina resultante (MBP2*.p26mod) foi detectada por SDS-PAGE em gel e Western blot com anticorpo monoclonal anti-HIS. A MBP2*.p26mod foi visualizada como uma banda de 68,5 kDa, a qual foi clivada com fator Xa resultando em duas bandas de 42,5 e 26 KDa, correspondentes a MBP2* e a p26mod respectivamente. A purificacao MBP2*.p26mod foi realizada por cromatografia de afinidade com resina de niquel e foi obtido um rendimento de 78,12 mg/L de cultura bacteriana. A proteina MBP2*.p26mod foi intensamente imunoreativa no teste de IDGA, onde foram observadas linhas de precipitacao unicas entre os soros positivos, inclusive o soro de referencia OIE, e a proteina MBP2*.p26mod, demonstrando altas especificidade e sensibilidade analiticas da proteina recombinante.