Caractérisation de facteurs impliqués dans l'épissage alternatif du pré-ARNm de la bêta-tropomyosine au cours de la différenciation myogénique

L’epissage alternatif favorise la selection de differentes combinaisons d’exons au sein d’un pre-ARNm permettant la synthese de plusieurs ARNm matures generant ainsi des proteines isoformes avec des fonctions distinctes voire antagonistes. Chez les eucaryotes superieurs, ce processus nucleaire de maturation des pre-ARNm est essentiel pour generer la diversite du proteome cellulaire. La thematique du laboratoire est l’analyse des mecanismes moleculaires qui regulent l’epissage alternatif des pre-ARNm chez les metazoaires. Notre modele d’etude est le pre-ARNm de la b-tropomyosine aviaire. Ce dernier possede dans sa region centrale deux exons mutuellement exclusifs selon le type cellulaire. L’exon 6A est inclus dans les ARNm des cellules non-musculaires et des cellules de muscles lisses tandis que l’exon 6B est incorpore dans les cellules de muscles squelettiques. Les objectifs du laboratoire sont de caracteriser de maniere exhaustive les elements cis et trans-regulateurs impliques dans le controle de l’epissage alternatif de ces deux exons au cours de la differenciation myogenique. Les travaux anterieurs du laboratoire (et d’autres equipes) suggeraient un role represseur de la region intronique en amont de l’exon 6B sur l’epissage de cet exon. Toutefois, les facteurs proteiques impliques dans le controle de la selection de l’exon 6B via cette sequence etaient jusqu’a present inconnus. L’identification de ces facteurs a fait l’objet de mon travail de these. Dans ce but, j’ai purifie les complexes proteiques associes a la region regulatrice en amont de l’exon 6B par la technique de chromatographie d’affinite en utilisant l’ARN comme appât. Les proteines ont ete separees par electrophorese bi-dimensionnelle et identifiees par spectrometrie de masse et western-blot. Nos resultats ont permis de caracteriser deux nouveaux facteurs impliques dans le controle de l’epissage alternatif de l’exon 6B. La proteine PTB reprime l’epissage de cet exon en inhibant les etapes precoces de l’assemblage du spliceosome. Nos resultats montrent que PTB interfere avec l’interaction du facteur d’epissage U2AF65 sur la region riche en pyrimidine et empeche l’association de la snRNP U2 sur le point de branchement de l’exon 6B. A l’inverse, les proteines de la famille CELF activent la selection de l’exon 6B. Nos resultats montrent un antagonisme entre les proteines PTB et CELF sur la selection de l’exon 6B. Par ailleurs, nos travaux ont permis d’identifier plusieurs autres facteurs dont la fonction dans la regulation de l’epissage alternatif de l’exon 6B reste a demontrer. Ces proteines, nommees nucleoline, p54nrb et TLS possedent des caracteristiques interessantes. En effet, ces facteurs font partie des proteines dites de couplage entre les processus de transcription et d’epissage et pourraient donc etre impliquees dans le controle de l’epissage alternatif de l’exon 6B lors de la differenciation myogenique.