OTIMIZAÇÃO DA EXTRAÇÃO DE PROTEÍNAS DE RAÍZES DE FEIJÃO-CAUPI (Vigna unguiculata) PARA ESTUDOS DE PROTEÔMICA

O estudo de proteomas, em vegetais, nada mais e que o conhecimento de um conjunto de proteinas que estao atuando em uma celula, tecido ou orgao, em uma condicao especifica, como situacoes de estresse, por exemplo, e a partir disso podem-se obter possiveis marcadores moleculares. As etapas basicas para os estudos em proteomas consistem na preparacao da amostra, separacao proteica, visualizacao das proteinas e identificacao das mesmas. Entretanto, devido a variedade de tecidos vegetais e uma serie de compostos que dificultam a analise proteica, torna-se dificil estabelecer um protocolo de extracao eficiente para todos os orgaos. Dessa forma o objetivo deste trabalho foi otimizar a extracao de proteinas em raizes ja lignificadas de Feijao-caupi a partir do protocolo de Mesquita (2012). Foram feitas 3 repeticoes, dos seguintes tratamentos nas raizes lignificadas: utilizacao de 10 mL de tampao de extracao e 1,5 g de material vegetal (controle), 10 mL de tampao de extracao e 2,0 g de material vegetal (10 mL x 2,0 g), 15 mL de tampao de extracao e 1,5 g de material vegetal (15 mL x 1,5 g) e 15 mL de tampao de extracao e 2,0 g de material vegetal (15 mL x 2,0 g). As raizes foram maceradas com N2 liquido e 10 mL de tampao de extracao. As amostras submetidas ao tratamento 15mLx1,5g e 15mLx2,0 foram lavadas novamente com mais 5mL de tampao de extracao. Posteriormente foi realizada a solubilizacao, quantificacao, seguida da focalizacao isoeletrica. A segunda dimensao foi efetuada em gel de poliacrilamida na presenca de SDS. As imagens dos geis corados com Coomassie G-250® (Colloidal) foram digitalizadas usando o Image Scaner III (GE Healthcare®). O tratamento que apresentou maior concentracao de proteinas foi o 15mLx2,0g, seguido do tratamento 15mLx1,5g. O tratamento controle e o 10 mL x 2,0 g apresentaram as menores medias, as quais nao diferiram entre si pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Quanto a nitidez e quantidade de spots os resultados foram similares. O melhor tratamento foi 15 mL x 2,0 g, seguido do tratamento 15 mL x 1,5 g, 10 mL x 2,0 g e 10 mL x 1,5 g. Os resultados atingidos foram satisfatorios, pois com o aumento do volume de tampao de extracao houve maior eficiencia em extrair as proteinas da amostra com tecido lignificado. Assim como a quantidade de amostra utilizada tambem foi fundamental nessa otimizacao. Tendo em vista os resultados obtidos, pode-se concluir que as alteracoes no volume de tampao de extracao (2 lavagens) apresentaram resultados melhores que os descritos no protocolo original, sendo o tratamento 15 mL x 2,0 g o que melhor respondeu em eficiencia.