针对MAG，OMgp，NogoA基因的scFv（OMgp）-9R-siRNA复合物的制备和鉴定

目的运用抗体靶向技术联合siRNA形成双特异性复合物scFv-9R-siRNA的高效递送系统，该系统通过抗OMgp的scFv把MAG，OMgp和NogoA的特异性siRNA特异性运输至受损神经细胞，从而抑制这三种轴突抑制物的表达，改善脊髓损伤后的局部微环境，阻断这些髓磷脂相关抑制物对轴突再生的抑制作用，为后续的大鼠模型试验奠定基础。方法（1）根据基因重组技术，利用制备好的高效抗OMgp单克隆抗体构建单链抗体scFv（OMgp），并在此基础上非共价合成针对MAG，OMgp，NogoA基因的scFv（OMgp）-9R—siRNA复合物；（2）体外鉴定scFv（OMgp）-9R—siRNA复合物效果：鉴定MAG，OMgp，NogoA三种抑制物的mRNA和蛋白表达水平，同时与非神经细胞对比，研究引入scFv后所产生的靶细胞特异性。结果（1）成功制备抗大鼠OMgp单克隆抗体E811，并通过ELISA和Westernblot对已制备的抗大鼠OMgp单克隆抗体E811进行了特异性和敏感性鉴定，在此基础上成功获得scFv（OMgp）-9R-siRNA复合物；（2）体外实验证实：scFv（OMgp）-9R。siRNA复合物同时特异性下调MAG，OMgp和NogoA基因表达。结论单链抗体技术（scFv）解决了siRNA的特异性导入受损神经元问题，为体内应用siRNA技术治疗脊髓损伤奠定了基础。