古菌Pyrococcus furiosus嗜热α—淀粉酶基因在酿酒酵母中的表达

用PCR方法从嗜热古菌Pyrococcus furiosus的基因组DNA中扩增出胞外α-淀粉酶成熟肽结构基因,插入pUC19中构建成质粒pUC19-amy.将pUC19-amy外源片段接入酿酒酵母表达载体pYX212多克隆位点,构建成载体pYX212-amy,电转化酿酒酵母W303-1A.转化子成功表达出有活性的高嗜热α-淀粉酶.重组酶具有与P. furiosus 产生的胞外α-淀粉酶相似的酶学性质:最适pH为5.0,最适温度约为90℃,在121℃下热处理30min酶活仍能保持50%以上.