Obtención y purificación de IgY dirigidas contra la lectina de Salvia bogotensis.

Introduccion. Las inmunoglobulinas presentes en la yema de huevo de gallina (IgY) han sido ampliamente utilizadas en inmunologia, bioquimica, biotecnologia y salud humana y animal. Aunque presentan una serie de ventajas frente a las IgG de mamiferos, su aislamiento requiere, por una parte, la eliminacion de los lipidos presentes en la yema del huevo sin alterar su funcionalidad y, por otra, la utilizacion de metodologias de purificacion que permitan una recuperacion tal que haga factible su empleo como herramientas de deteccion y purificacion a una escala significativa. Objetivo. Dado el interes que presenta el antigeno Tn como marcador tumoral en muchos tipos de cancer, y la capacidad que tiene la lectina aislada de semillas de Salvia bogotensis para reconocer especificamente este antigeno, se adelanto el presente trabajo con la meta de disponer de IgY anti-lectina para emplearla en estudios inmunohistoquimicos y de biologia celular. Materiales y metodos. Se produjo IgY anti-lectina inmunizando gallinas con lectina de S. bogotensis y se evaluo la respuesta inmune en funcion de la dosis y del tiempo; se ensayaron varios metodos de remocion de lipidos y de extraccion y se compararon los rendimientos y la pureza de IgY obtenidas con varios metodos de purificacion. Resultados. El mejor metodo de delipidacion y extraccion de IgY requiere dilucion con agua, acidificacion del extracto y precipitacion con (NH4)2SO4 60%s, recuperandose 43,35 mg de proteina/yema. La cromatografia tiofilica permite obtener las IgY puras en buena cantidad (10,4 mg/yema), preservando la funcionalidad y caracteristicas de estos anticuerpos. Conclusion. Se establecieron las mejores condiciones para extraer y purificar IgY funcionales dirigidas contra la lectina de S. bogotensis.