L'organisation de la chaîne de transfert d'électrons respiratoire : développement d'une nouvelle méthode pour l'étude spectrophotométrique en temps réel des transferts d'électrons respiratoires dans des cellules entières

Le moyen principal par lequel la majorite des etres vivants parvient a disposer de l'energie necessaire a l'entretien et au developpement cellulaires est la respiration, ensemble de reactions d'oxydo-reduction couplees a la synthese d'ATP, « monnaie » energetique de la cellule, par le biais d'une translocation de protons de part et d'autre de la membrane interne des mitochondries. Un sujet central dans l'etude de la chaine de transfert d'electrons (CTE) respiratoire reside dans le mode d'organisation des elements qui la constituent. En particulier, un nombre important d'experiences recentes ont demontre la possibilite d'isoler par des moyens biochimiques des « supercomplexes » constitues de plusieurs des complexes de la chaine respiratoire physiquement associes entre eux, menant a une remise en cause du « modele des collisions aleatoires » predominant jusqu'alors. Afin de contribuer a repondre a cette question, nous avons developpe une methode permettant l'observation spectrophotometrique en temps reel des transferts d'electrons respiratoires dans des cellules intactes de S. Cerevisiae, et possiblement d'autres organismes. Cette technique est basee sur l'approche « flow-flash » inventee par Gibson & Greenwood en 1963, et largement mise en oeuvre par la suite dans l'etude de la cytochrome c oxydase in vitro. Nous demontrons par cette approche l'absence de contraintes pesant sur la diffusion du cytochrome c, suggerant que les supercomplexes ne canalisent pas les transporteurs solubles de la respiration dans la CTE des cellules entieres.