基于 toxR 基因的轮虫弧菌荧光定量微流控快速检测技术的建立

以轮虫弧菌的单拷贝基因toxR基因的高保守区域为目的片段，设计特异性引物，构建重组质粒标准品，建立针对该菌的荧光定量PCR检测方法。以此为基础，实验选用UF-150 Genechecker微流控荧光定量PCR仪，通过优化反应体系和反应条件，建立了轮虫弧菌的微流控荧光定量PCR检测方法。结果显示，该方法能特异性扩增toxR基因目的片段，对轮虫弧菌纯培养物检测下限为1.34×100 拷贝/μL。在人工感染样品中的应用结果显示，对鱼体组织中轮虫弧菌的检测下限为1.34×103 CFU/g，检测结果可以目视判读，检测时间缩短至42 min以内。研究表明，该检测方法具有特异性强、敏感度高、场地要求低等突出优势，适于开发水产病原实用性的现场快速检测技术。