重组鸡β-防御素5-β-防御素10双分子蛋白的构建及其理化特性分析

鸡抗菌肽属禽β-防御素（AvBD）类，是鸡先天性免疫的重要组成部分。研究将AvBDIO基因定向插入到AvBD5-pGEX Sal I和Not I双酶切位点上，构建了AvBD5-pGEX-AvBD10双基因共表达重组载体。将重组质粒转化大肠杆菌（Escherichia coli）BL21，于37℃不同时间进行诱导表达，SDS-PAGE检测外源基因的表达。结果表明，重组AvBD5-AvBD10双分子融合蛋白的分子量约为36kD，重组双分子蛋白占菌体总蛋白的35％，重组菌表达产物以包涵体形式存在。重组双分子蛋白经纯化后，分别以对数生长中期的大肠杆菌[BL21（DE3-）株]与致病性链球菌[Streptococcus（CAB株）]为检测菌，利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组双分子蛋白的抗菌活性，结果表明，重组双分子蛋白对这两种细菌都具有抗菌活性。并且对温度和pH有很高的稳定性，在-70-100℃或pH3-12处理30min仍具有抗菌活性。