H5亚型禽流感病毒的逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）检测技术

根据GenBank中H5N1亚型流感病毒HA基因保守区的序列，设计1组对应HA序列6个区域的4条特异性引物进行核酸扩增，建立RT～LAMP反应体系，优化LAMP反应条件，最佳等温扩增反应条件为65℃保温60min。扩增后产物加入核酸染色剂SYBRI和4mmol／L Mg^2＋，结果可视。扩增产物可用特异性内切酶KpnI进行酶切鉴定。用已建立的RT—LAMP技术检测临床样品，检测结果与RT—PCR方法一致。RT—LAMP技术整个检测过程只需1～2h，不需要PCR仪和成像系统，仅需要一恒温水浴锅即可完成试验。通过特异性、敏感性试验，验证了建立的RT-LAMP技术可以作为一种操作简单，灵敏性、特异性高的检测H5亚型禽流感病毒的方法。