猪繁殖与呼吸综合征病毒HB-3（cz）杉ORF5基因序列分析及原核表达

从河北沧州分离到1株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒，接种Marc-145细胞，经过4代盲传后，出现细胞病变，经鉴定为PRRSV，命名为H13-3（cz）株。根据GenBank公布的PRRSV CH—1a株ORF5基因的核苷酸序列，设计合成一对特异性引物（P1／P2），用RT-PCR方法扩增完整ORF5基因，将扩增产物连接到pGM-T载体并转化克隆菌，阳性重组质粒进行序列测定与分析。再设计另一对引物（P3／P4）从重组载体pGM—ORF5中扩增出缺失了N端28个氨基酸残基的tGP5的编码序列tORF5，克隆入原核表达载体pGEX-6P-1，并成功获得表达，经Western-blotting分析表明，表达蛋白与阳性血清发生特异性反应。为研制PRRSV新型疫苗及诊断试剂奠定了基础。