副溶血弧菌III型分泌系统1内杆状蛋白基因 vscI 的功能分析

目的Ⅲ型分泌系统（Type Ⅲ secretion systems，T3SS）在副溶血弧菌（Vibrio parahemolyticus）致病过程中发挥重要作用。本试验旨在探讨T3SS1内杆状蛋白基因vscI的功能。 方法以副溶血弧菌POR-1菌株为研究对象，构建vscI缺失株ΔvscI与回补株CΔvscI，检测野生株、缺失株与回补株的细胞毒性、细胞黏附等生物学特性，分析vscI缺失对副溶血弧菌感染细胞能力的影响；通过Western blot与ELISA检测HeLa细胞内效应蛋白的易位量。 结果与POR-1菌株相比，缺失菌株ΔvscI在生长速度上并无显著差异，但对HeLa细胞的黏附能力下降85%。细胞毒性检测结果显示：与POR-1菌株相比，缺失株ΔvscI感染细胞组释放LDH量显著下降60%。同时与野生株POR-1感染HeLa细胞组相比，ΔvscI感染HeLa细胞组发生凋亡的细胞数量显著下降了85%。腺苷酸环化酶报告系统研究结果显示：与POR-1菌株感染组相比，ΔvscI菌株感染HeLa细胞内的cAMP含量显著下降，CyaA融合蛋白的易位量显著下降，而在回补株CΔvscI中上述生物性状均恢复。 结论vscI提高了副溶血弧菌对细胞的黏附能力和毒力，促进细胞凋亡，同时对于T3SS1效应子的易位是必需的。