苏云金芽孢杆菌伴孢晶体中20—kb DNAs上染色体基因的鉴定

已有的研究表明苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）4．0718菌株菱形晶体中含有与原毒素紧密结合的20-kbDNAs，利用PCR-RFLP分析发现在这些20-kbDNAs上含有cry1Aa、cry1Ac、cry2Aa和cry2Ab基因．本研究利用特异引物从4．0718菌株中20-kbDNAs上分别扩增出带有自身调控序列的cry1Ac和cry2Aa基因，并将其分别电转至Bt无晶体菌株Cry^-B中获得重组菌株Cry^-B（pHC42）和Cry^-B（pHC39）．SDS-PAGE和透射电镜分析表明这两种重组菌株能够分别产生由130-kDa的Cry1Ac原毒素形成的菱形晶体以及由65-kDa的Cry2Aa原毒素形成的方形晶体．毒力生测的结果显示，这两种菌株的表达产物对棉铃虫（Helicoverpa armigera）幼虫具有预期的杀虫效果．重组菌株分别形成的两种晶体经不同的缓冲液溶解后能释放出与20-kbDNAs紧密结合的原毒素，同时在20-kbDNAs上均可检测到源于Bt染色体的spo0A和nprA基因片段．