Réplication de baculovirus sauvage et recombinant dans un système cellulaire en absence de sérum de veau foetal (SVF)

Les virus des polyedroses nucleaires (VPN) sont des baculovirus tres interessants car ils peuvent etre utilises comme bioinsecticides contre plusieurs insectes ravageurs de plantations, ou comme vecteurs d'expression de genes pour la production de proteines d'interets medicaux, biologiques et pharmaceutiques. Les VPN sont tres susceptibles aux mutations en culture cellulaire. Pourtant, une stabilite sur plusieurs passages viraux successifs en culture cellulaire est necessaire pour que la production massive de bioinsecticides et de proteines recombinantes soit possible. C'est pourquoi, plusieurs etudes ont evalue la stabilite de VPN dans differents systemes cellulaires contenant du serum de veau foetal (SVF). Toutes ces etudes ont demontre une stabilite virale sur 10 passages viraux en moyenne, apres quoi la presence de mutants FP (Few Polyhedra) etait evidente. Par contre, aucune etude de stabilite de VPN n'a ete effectuee dans un systeme cellulaire sans SVF. Notre laboratoire possede une lignee cellulaire adaptee a un milieu de culture tres simple sans SVF qui supporte encore tres bien la production de VPN meme apres plus de 500 passages cellulaires. Comme le SVF est un produit tres dispendieux, peut contenir des facteurs cytotoxiques, est susceptible aux contaminations par les mycoplasmes et nuit a la purification des proteines recombinantes, il semblait interessant de verifier si notre systeme cellulaire sans SVF offre une stabilite de production de VPN aussi elevee qu'un systeme cellulaire avec SVF, autant pour la production de bioinsecticides que pour celle de proteines recombinantes. Le virus sauvage GmMVPN a ete utilise pour verifier la stabilite de production de bioinsecticides, alors que le virus AcLuci, recombinant hybride de AcMVPN et de BmMVPN exprimant la luciferase au lieu de la polyedrine, a ete utilise pour verifier la stabilite de production de proteines recombinantes. Apres 10 a 12 passages du GmMVPN sauvage dans notre systeme cellulaire sans SVF, des caracteristiques reliees a l'apparition de mutants FP ont ete observees, dont une diminution du nombre de polyedres totaux et par cellule infectee, du pourcentage de cellules infectees, du nombre de virions a l'interieur des polyedres, de la synthese de membrane virale de novo et de la virulence des polyedres envers des larves de Galleria mel/one/la. Une modification de la forme des polyedres, une augmentation de la production de virus extracellulaires et l'expression de deux nouvelles proteines virales ont egalement ete observees apres plusieurs passages viraux. De plus, une diminution de l'expression de la polyedrine et d'une proteine de 23 kDa suggere que les mutants FP obtenus proviennent entre autres de mutations dans le gene FP25K de GmMVPN, concordant avec plusieurs etudes dans un systeme cellulaire avec SVF. Finalement, en fonction des passages du recombinant AcLuci dans notre systeme cellulaire sans SVF, une stabilite d'expression de luciferase, et par consequent de proteines recombinantes, a ete observee sur plus de 18 passages viraux. Notre systeme cellulaire sans SVF offre donc une stabilite virale sur plusieurs passages viraux successifs aussi elevee que dans un systeme cellulaire avec SVF, permettant ainsi une production simple et rentable de bioinsecticides et de proteines recombinantes a l'aide de baculovirus.