Isolation de proteines de liaison ayant une haute affinite avec des ligands

L'invention porte sur une rapide approche de l'isolation des proteines de liaison capables de se lier a de petites molecules et a des peptides par un criblage de banque « sans methode d'expression ». Selon la technique, les banques de proteines de liaison, telles que des sequences d'anticorps, sont exprimees sous forme soluble dans l'espace periplasmique des bacteries gram negatif telles que Escherichia coli, et sont melangees a un ligand marque. Dans des clones exprimant des polypeptides de recombinaison ayant une affinite pour le ligand, la concentration du ligand marque, lie a la proteine de liaison, est accrue et permet aux cellules d'etre isolees du reste de la banque. Lorsque le marquage fluorescent du ligand cible est utilise, des cellules peuvent etre isolees par un tri cellulaire active par la fluorescence. Cette approche est plus rapide que celles des procedes de la technique anterieure et evite l'apparition de problemes lies a l'expression a la surface de proteines de fusion du ligand utilisees avec la methode d'expression a la surface des phages.