Hey1表达对BMP-9诱导下C3H10T1/2细胞的成骨分化及增殖影响

目的探讨Notch信号通路重要靶点Hey1表达水平改变对BMP-9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化与增殖的影响。方法构建过表达Hey1慢病毒LV-Hey1、抑制Hey1表达慢病毒LV-shHey1,分别感染C3H10T1/2细胞干预Hey1表达水平,以LV-Blank（空质粒）感染C3H10T1/2细胞作为对照;以荧光显微镜对慢病毒感染效果、实时荧光定量PCR以及Western blot对Hey1表达水平进行验证,筛选不同Hey1表达水平的稳定细胞系。用含BMP-9的条件培养基诱导不同Hey1表达水平的C3H10T1/2细胞（分别为BMP-9＋C3H10T1/2组、BMP-9＋C3H10T1/2-Hey1组、BMP-9＋C3H10T1/2-shHey1组）,以正常培养基培养的细胞作为对照（C3H10T1/2组、C3H10T1/2-Blank组）。培养后48 h,实时荧光定量PCR及Western blot测定成骨分化相关转录因子Runx2、骨桥蛋白、骨钙素mRNA及蛋白表达水平;4、5、6、7 d行MTT检测及4、5、10 d行流式细胞仪测定细胞增殖能力;4、7 d时ELISA测定细胞ALP表达水平并行染色观察。结果成功建立不同Hey1表达水平稳定细胞系。成骨方面,各时间点与BMP-9＋C3H10T1/2组比较,BMP-9诱导下Hey1过表达的BMP-9＋C3H10T1/2-Hey1组细胞Runx2、骨桥蛋白、骨钙素mRNA及蛋白表达水平以及成骨分化标志物ALP含量均显著增加（P〈0.05）,抑制Hey1表达的BMP-9＋C3H10T1/2-shHey1组细胞以上指标均显著降低（P〈0.05）。对细胞增殖活力影响方面,与BMP-9＋C3H10T1/2组比较,BMP-9＋C3H10T1/2-Hey1组MTT检测吸光度（A）值及细胞G2＋S期百分比均提高（P〈0.05）;而抑制Hey1表达BMP-9＋C3H10T1/2-shHey1组以上指标均降低（P〈0.05）。结论 Hey1表达是BMP-9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化重要环节,同时影响细胞早期增殖。