Bohaisea-9145海洋耶氏酵母碱性脂肪酶基因的克隆、异源表达和重组酶酶学性质

采用基因重组和分子生物学相关技术，对Yarrowia lipolytica Bohaisea-9145海洋低温碱性脂肪酶（zlipolytica Bohaisea-9145，LipYp）基因坳rp（1116bp）克隆并在Pichiapastoris中进行了异源真核表达研究。通过MD和MM平板及PCR扩增，筛选和鉴定了重组子。结果表明，阳性重组子经摇瓶发酵54h后上清液酶活力达到1956U／ml。发酵液经两步纯化得到在SDS—PAGE上显示为单一条带的重组脂肪酶。实验同时研究了不同反应温度、pH值对重组LipYp活力和稳定性的影响，结果显示重组LipYp最适反应温度和pH分别为35℃和8．5，在pH7．0—10．5之间以及45℃以下有较好稳定性。另外．重组脂肪酶对中长链对硝某苯基酯类和甘油三酯类rC10-C12、有较强的水解能力。