不同质粒载体对 GFP 单基因瞬时转染ExpiCHO-S细胞表达量的影响

目的  ExpiCHO细胞瞬时表达能够快速有效地生产重组蛋白，为筛选有效的重组蛋白节省了大量的时间，细胞系的选择、表达载体的选择、转染试剂的选择等是制约ExpiCHO细胞瞬时表达蛋白的重要因素，本研究旨在筛选出在CHO细胞中瞬时表达量较高的载体。 方法  以GFP基因作为目的基因，用不同的真核表达载体构建GFP重组质粒，瞬时转染ExpiCHO-S细胞。转染后4 d观察不同载体表达GFP的荧光数量和强度；转染后8 d对细胞进行裂解，收获裂解上清，用SDS-PAGE对不同载体的表达量进行鉴定。同时用His Trap FF亲和层析柱对裂解上清中的GFP蛋白进行纯化，通过Western Blot比较不同载体GFP蛋白的表达量。 结果  pCDNA3.1-GFP、pCDNA3.4-GFP载体表达的荧光数量最多，pCIneo-GFP载体表达的荧光强度最强，pCMVHA载体表达的荧光数量最少，荧光强度最弱。SDS-PAGE和Western Blot结果均表明pCDNA3.1-GFP、pCDNA3.4-GFP、pCIneo-GFP重组质粒的蛋白表达量高于pCHO-GFP、pCMVHA-GFP重组质粒的蛋白表达量。 结论  筛选出表达量较高的真核表达载体pCDNA3.1、pCDNA3.4、pCIneo，为后续重组蛋白的瞬时表达载体选择提供依据。