A process for producing phospholipase A2

Der Erfindung liegt das Problem zu Grunde, eine Phospholipase A 2 zu gewinnen, die nicht aus einem tierischen Organismus isoliert wird, in industriellem Masstab herstellbar ist und fur die biokatalytische Spaltung von Phospholipiden geeignet ist. Analog der Nukleotidsequenz des Gens der naturlich vorkommenden PLA 2 der Honigbiene werden Oligonukleotide mit jeweils 50-60 bp synthetisch hergestellt, die alternierend die beiden Strange der DNA darstellen und an ihren Enden jeweils um bis zu 25 Nukleotide komplementar uberlappen. Das dem N-Terminus des Proteins entsprechende DNA-Ende wird modifiziert und das Codon fur das N-terminale Isoleucin durch das Codon fur Alanin oder Valin ersetzt. Mittels PCR-Technik wird aus den synthetisch hergestellten Oligonukleotiden die vollstandige Gensequenz erhalten. Das Enzym wird mittels Proteinexpression in der Zelle erhalten, welches anschliesend isoliert und renaturiert wird. Phospholipase A 2 wird zur biokatalytischen Spaltung von naturlich vorkommenden Phospholipiden eingesetzt. Die spezifischen Spaltprodukte (Lysophospholipide) gelangen als Emulgatoren in der pharmazeutischen, kosmetischen und Diatmedizin zum Einsatz.