Rôle des protéines IbeA et IbeT dans les propriétés d'adhésion de la souche d'Escherichia coli pathogène aviaire BEN2908

Escherichia coli est une espece bacterienne a multiples facettes. En effet, certaines souches sont presentes a l’etat commensal au niveau intestinal, ou sont utilisees comme probiotiques. A l’inverse, d’autres souches sont responsables d’infections intestinales ou extra-intestinales chez l’Homme et les animaux a sang chaud. Les souches d’E. coli pathogenes extra-intestinales (ExPEC) sont responsables de nombreuses maladies infectieuses (meningites neo-natales, infections urinaires, septicemies ou infections respiratoires). Plusieurs facteurs de virulence ont ete identifies chez les souches ExPEC (adhesines, invasines…) et notamment la proteine IbeA, mise en evidence dans une souche isolee d’un cas de meningite neo-natale humaine. Le gene ibeA est retrouve chez differentes souches ExPEC, dont certaines d’origine aviaire. Il est localise au sein de l’ilot genomique GimA, sur un des quatre operons de cet ilot, entre ibeR codant un potentiel regulateur et ibeT codant un potentiel antiporteur. La proteine IbeA a ete decrite comme jouant un role dans l’invasion bacterienne des cellules endotheliales microvasculaires de cerveau humain (HBMEC). Afin de mieux comprendre le role d’IbeA dans le processus infectieux et l’invasion cellulaire, nous avons etudie l’implication d’IbeA dans l’adhesion de la souche ExPEC d’origine aviaire BEN2908 puis tente de determiner la localisation de cette proteine et son lien avec la proteine IbeT. L’etude phenotypique comparative de la souche BEN2908 et de son mutant ?ibeA nous a montre qu’IbeA intervenait des le stade de l’adhesion aux HBMEC. Des tests d’adhesion en absence des fimbriae de type 1 (adhesine majeure de notre souche) nous ont montre que dans ce contexte, IbeA n’avait pas d’action sur l’adhesion. Ce resultat nous a suggere qu’il pouvait y avoir une baisse d’expression des fimbriae de type 1 a la surface bacterienne dans un mutant ?ibeA, ce que nous avons montre par dots blots. Pour comprendre comment IbeA entrainait une modification de l’expression des fimbriae de type 1, nous nous sommes interesses au controle de l’expression des genes de l’operon fim. Nous avons ainsi montre que le promoteur de ces genes, localise sur un element invertible, etait preferentiellement dans une orientation ne permettant pas la transcription des genes fim dans un mutant ?ibeA. Nous avons ensuite mis en evidence chez le mutant ?ibeA une baisse de l’expression des genes fimB et fimE qui codent pour deux recombinases participant au controle de l’orientation de l’element invertible. Ces baisses d’expression de fimB et fimE pourraient expliquer la diminution d’expression des fimbriae de type 1 dans le mutant ?ibeA. Enfin, des phenotypes similaires a ceux du mutant ?ibeA ont ete observes chez un mutant ?ibeT. La localisation d’IbeA est indispensable pour comprendre comment cette proteine peut agir sur l’expression des recombinases FimB et FimE. Nous avons localise IbeA dans le compartiment cytoplasmique, mais l’incertitude sur la fonctionnalite d’IbeA dans les constructions genetiques utilisees necessite de confirmer ces premiers resultats. Enfin, nous avons recherche un role metabolique pour IbeA et IbeT etant donnees les homologies d’IbeT avec des transporteurs de composes carbones. Nous avons observe qu’un mutant ?ibeT presentait un retard de croissance par rapport a la souche sauvage et au mutant ?ibeA dans des cultures en milieu minimum avec du fumarate, du succinate, du malate ou de l’aspartate comme seule source de carbone. Ces resultats suggerent un lien entre le metabolisme de certains dicarboxylates, l’expression des fimbriae de type 1 et les proteines IbeA et IbeT. Ils ouvrent de nombreuses perspectives pour la comprehension du mecanisme d’action d’IbeA et IbeT.