Protección de Enterococcus faecalis en cultivo mixto con Escherichia coli y Bacteroides fragilis productores de carbapenemasa: efecto del inóculo bacteriano

espanolIntroduccion. Este estudio explora los efectos del tamano del inoculo y el pH en la actividad de imipenem versus tigeciclina frente a E. coli, B. fragilis y E. faecalis, en cultivo individual y mixto. Metodos. Los valores de CMI/CMB (mg/L) de tigeciclina e imipenem fueron 0,12/≥16 y 4/4 para E. coli, 0,12/0,5 y ≥16/≥16 para B. fragilis, y 0,12/≥16 y 2/≥16 para E. faecalis, respectivamente. Se realizaron curvas de letalidad en caldo Brucella suplementado a pH 7 o 5,8 con dos inoculos finales (≈105 o ≈107 ufc/ml) de cada aislado (cultivos individuales) y de un inoculo mixto en proporcion 1:1:1. Los tubos se incubaron durante 48h a 37oC en anaerobiosis. Las concentraciones antibioticas finales (concentraciones estimadas en colon) fueron 1,50 mg/L de tigeciclina y 26,40 mg/L de imipenem. Se usaron como control curvas de crecimiento bacteriano en medio sin antibiotico y los experimentos se realizaron por triplicado. Resultados. Imipenem mostro efecto inoculo frente a E.coli y B. fragilis, con reducciones del inoculo inicial en los experimentos realizados con inoculo estandar en contraposicion a los crecimientos del inoculo inicial observados en los experimentos realizados con inoculo alto, tanto en cultivos individuales como mixtos. Frente a E. faecalis imipenem no presento efecto inoculo en cultivos individuales, con marcadas reducciones del inoculo inicial con independencia del tamano del mismo. Sin embargo en cultivo mixto la proteccion indirecta de E. faecalis por los dos aislados gramnegativos produjo un recrecimiento bacteriano. Esta proteccion fue dependiente del tamano del inoculo ya que ocurrio en los experimentos con inoculo alto pero no en los realizados con inoculo estandar. Tigeciclina redujo el inoculo inicial de los tres aislados con independencia del tipo de cultivo (individual/mixto) o las condiciones experimentales (pH/tamano del inoculo), con menores reducciones en el caso de E. faecalis tolerante a este antibiotico. Conclusion: La actividad carbapenemasa fue inoculo independiente para autoproteccion y proteccion indirecta de E. faecalis. EnglishIntroduction. This study explores effects of pH and inoculum size on imipenem versus tigecycline activity against E. coli, B. fragilis and E. faecalis, both in individual and mixed cultures. Methods. MIC/MBCs (mg/L) of tigecycline and imipenem were 0.12/≥16 and 4/4 for E. coli, 0.12/0.5 and ≥16/≥16 for B. fragilis, and 0.12/≥16 and 2/≥16 for E. faecalis, respectively. Killing curves in supplemented Brucella broth were performed at pH 7 or 5.8, with two final inocula (≈105 or ≈107 cfu/ml) of each isolate (individual cultures) and with 1:1:1 mixed inocula. Tubes were 48h incubated at 37oC in anaerobiosis. Final concentrations (estimated concentrations in colon) were 1.50 mg/L for tigecycline and 26.40 mg/L for imipenem, with antibiotic-free curves as controls. Experiments were performed in triplicate. Results. Imipenem showed inoculum effect against E.coli and B. fragilis, with reductions in initial inocula in experiments with standard inocula contrasting with increases in experiments with high inocula (both individual and mixed cultures). Against E. faecalis no inoculum effect for imipenem was observed in individual cultures, with marked reductions in initial inocula regardless inoculum size. However in mixed experiments the indirect protection of E. faecalis by the two gramnegatives resulted in bacterial regrowth. This protection was inoculum-dependant since it occurred with high but not with standard inocula. Tigecycline reduced initial inocula of the three isolates regardless culture type (individual/mixed) or experimental conditions (pH/inocula size), with lower reductions for the tolerant E. faecalis. Conclusion. Carbapenemase activity was inoculum-dependant for self-protection and indirect protection of E. faecalis.