布鲁氏菌环介导等温扩增（LAMP）可视化检测方法的建立

应用环介导等温扩增（LAMP）技术建立了布鲁氏菌可视化快速检测方法。针对布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因保守区设计6条特异引物，反应前加入染料羟基萘芬蓝（HNB）作为LAMP扩增的指示剂，63℃恒温反应60min，根据HNB的颜色变化进行结果判定。分别评价所建立LAMP方法的特异性和灵敏性，并对60份牛布鲁氏菌病虎红平板凝集试验（RBT）阳性血清样本，经LAMP和B4但5-PCR方法进行平行检测。结果显示，本方法最低检出限约为17垃布鲁氏菌基因组DNA。本方法特异性良好，布鲁氏菌反应管均出现特异性LAMP扩增反应，而猪大肠杆菌K99、巴氏杆菌C48—1、猪链球菌ST171、绿脓杆菌等对照组均未出现扩增。针对60份RBT阳性血清的平行检测结果显示，LAMP和B4／B5．PCR这两种方法间的结果符合率为85．0％。B4／B5-PCR检测为阳性的43份样品，经本方法检测全部为阳性；B4／B5-PCR检测为阴性的17份样品，经本方法检测，9份为阳性，8份为阴性。LAMP的敏感性高于B4／B5-PCR方法。实验表明，本文所建立的基于颜色判定的布鲁氏菌LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点，适用于基层兽医部门进行布鲁氏菌的快速检测。