miR-7沉默EGFR/PI3K通路逆转脑胶质瘤U251细胞的恶性表型

目的：探讨利用微RNA（microRNA-7,miR-7）靶向沉默表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）/磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol kinase-3,PI3K）通路途径逆转脑胶质瘤的恶性表型。方法：利用脂质体转染法将带有miR-7基因序列的表达质粒转入人脑胶质瘤细胞株U251中;采用实时荧光定量-PCR（real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR）方法检测转染细胞中miR-7的表达水平;免疫细胞化学法和蛋白质印迹法检测EGFR、PI3K和AKT2蛋白的表达情况;绘制细胞生长曲线,FCM法检测细胞周期变化,Transwell小室法检测瘤细胞迁移能力,软琼脂克隆形成实验检测肿瘤细胞致瘤性。结果：RFQ-PCR结果显示,miR-7基因转染组细胞中miR-7水平明显高于对照组和无义序列组;蛋白质印迹法检测结果显示,转染组U251细胞中EGFR、PI3K和AKT2蛋白的水平较对照组均有明显降低（P〈0.05）;U251细胞增殖速度减慢,处于S期的细胞所占比例减少,细胞迁移及软琼脂克隆形成能力均有明显降低（P〈0.05）。结论：转染miR-7可有效沉默胶质瘤U251细胞中EGFR/PI3K通路主要成员蛋白的表达,进而逆转其恶性表型,有望成为一种新的胶质瘤基因治疗方法。