Агонист-специфичное участие SOC- и ARC-каналов и iPLA2в регуляции входа Са2+при колебательных ответах в адипоцитах

Активация входа Са2+ при стимуляции клеток агонистами может обеспечиваться различными механизмами, включая депо-управляемый вход Ca2+ (store-operated calcium entry, SOCE) и действие продуктов фосфолипазы A2 (PLA2). В связи с существованием в адипоцитах двух относительно независимых путей мобилизации Са2+ из внутриклеточных запасов, в данной работе мы изучили, сопряжены ли эти пути с индивидуальными механизмами входа Са2+ в клетку. Показано, что ацетилхолин (ACh) вызывает колебательные изменения концентрации Са2+ в цитозоле, не зависящие от ингибирования SOCE посредством YM-58483 или 2-APB. Эти колебания устранялись при добавлении La3+, который ингибирует как депо-управляемые Ca2+-каналы, так и ARC-каналы (регулируемые арахидоновой кислотой, АА). Ответы на ACh подавлялись AACOCF3, ингибирующим PLA2 типов IV и VIA (iPLA2). Колебания под действием эмбриональной коровьей сыворотки (FBS), отличавшиеся достижением базального уровня между спайками, напротив, прекращались в присутствии YM-58483 или La3+, но не зависели от AACOCF3. Одна и та же клетка могла отвечать на ACh и FBS при их последовательном добавлении в любом порядке с промежуточной отмывкой. Подобные по форме колебательные ответы (от базального или повышенного уровня) на фенилэфрин постепенно затухали после ингибирования фосфолипазы C или рецептора инозитол-1,4,5-трисфосфата и частично ослаблялись ингибиторами YM-58483 или La3+ без существенного влияния AACOCF3. АА в концентрации 1–10 мкМ вызывала колебания при добавлении как после спонтанного прекращения ACh-индуцированных колебаний, так и самостоятельно, причем после ACh отчетливый эффект достигался при меньших концентрациях АА. Ингибитор кальмодулина R24571 вызывал колебания, которые могли подавляться YM-58483 или AACOCF3, что указывает на активацию, соответственно, SOCE и iPLA2. В целом эти результаты показывают, что механизм активации входа Са2+ зависит от того, какой сигнальный путь затрагивается агонистом. Ацетилхолин не вовлекает SOCE, но активирует PLA2 с вероятным участием формы VIA, что сопровождается действием ее продукта(-ов) на ARC-каналы и, возможно, на лизофосфолипид-активируемые каналы. FBS действует через SOCE без участия PLA2. Эти два варианта могут сосуществовать в случае фенилэфрина.