Synthesis of Sonic Hedgehog protein and development of peptide binders using phage display libraries

En la presente tesis se ha desarrollado una metodologia basada en el linker N-acylurea (MeDbz), que consiste en la acilacion de la amina con un cloroformato para obtener los peptidos con este linker en C-terminal. En solucion, el linker contenido en estos peptidos se activa aumentando ligeramente el pH a 7.5. Esto provoca la ciclacion del linker y la posterior tioesterificacion para obtener finalmente los correspondientes tioesteres peptidicos. Esta metodologia puede ser usada para la sintesis de proteinas mediante ligaciones cineticas controladas y tambien Ligacion Quimica nativa. Con la finalidad de confirmar la utilidad de esta nueva metodologia en la sintesis de proteinas, en esta tesis hemos sintetizado dos analogos de la proteina Sonic Hedgehog. Recientemente se ha relacionado esta proteina con diferentes tipos de cancer, lo cual la convierte ademas en una posible diana terapeutica. Esta proteina esta constituida por 178 amino acidos y contiene ademas dos residuos lipidicos en el extremo C y N terminal. Una vez la proteina fue sintetizada, se decidio usar phage display con la finalidad de obtener ligandos que pudieran servir como posibles inhibidores. Asi pues, mediante phage display en proteina p8 se probaron ocho librerias peptidicas de entre 20 y 60 amino acidos contra los analogos sintetizados. Estos ensayos resultaron con la obtencion de ocho clones que presentaban una afinidad de rango nanomolar frente a Sonic Hedgehog.