宽体沙鳅（Botia reevesae）热休克蛋白70基因的克隆及表达分析

为深入分析热休克蛋白响应胁迫的分子机制,实验以宽体沙鳅（Botia reevesae）为研究对象,利用同源克隆和cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends,RACE）技术克隆得到宽体沙鳅热休克蛋白70（heat shock protein,BR-HSP70）的cDNA全长。结果发现,BR-HSP70 cDNA全长为2371bp,包含1947bp的开放阅读框（opening reading frame,ORF）,102bp 5′-非编码区（untranslated region,UTR）和322bp 3′-UTR等。通过序列同源性比对发现,BR-HSP70 cDNA与团头鲂（Megalobrama amblycephala）和猪（Sus scrofa）的同源性分别为98%及83%,且ORF编码的649个氨基酸中含有HSP70家族的家族信号标签、N-糖基化位点及EEVD等保守区域。结果表明,克隆的cDNA为宽体沙鳅HSP70基因。实时荧光定量PCR分析发现,氨氮胁迫和嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）侵染均会显著上调宽体沙鳅鳃、肝脏及肾脏HSP70 mRNA的表达（P〈0.05）,表明HSP70基因在宽体沙鳅应对环境胁迫中发挥了重要的抗应激作用。