miR-186-5p调控猪原代前体脂肪细胞增殖和分化的研究

旨在探究miR-186-5p对猪原代前体脂肪细胞增殖和成脂分化的调控作用及机制。本研究采集7日龄健康马身猪公猪的颈部皮下脂肪，分离培养马身猪原代前体脂肪细胞；猪原代前体脂肪细胞分为4组，分别转染miR-186-5p模拟物（mimics）及其对照组（mimics NC），miR-186-5p抑制剂（inhibitor）及其对照组（inhibitor NC），用CCK8和划痕试验分析猪原代前体脂肪细胞的增殖效果，油红O染色检测其成脂分化能力，qPCR检测其增殖和成脂分化相关基因的表达水平；预测miR-186-5p的靶基因，用双荧光素酶报告试验检测miR-186-5p与靶基因的相互作用。结果，当猪原代前体脂肪细胞中转染mimics时，miR-186-5p的表达量极显著升高（P < 0.01），细胞增殖能力和增殖相关基因：增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、周期蛋白依赖性激酶4（cyclin-dependent kinases 4，CDK4）的表达量以及预测靶基因去乙酰化酶2（sirtuins 2，SIRT2）的表达量都极显著降低（P < 0.01），而细胞成脂分化能力和成脂分化相关基因：过氧化物酶体增殖剂激活受体γ（peroxisome proliferators-activated receptor γ，PPARγ）、固醇调节元件结合转录因子1（sterol regulatory element binding transcription factor 1，SREBF1）、CCAAT增强子结合蛋白β（CCAAT enhancer binding protein β，C/EBPβ）、脂肪酸结合蛋白4（fatty acid-binding protein 4，FABP4）、脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase，LPL）的表达量都极显著升高（P < 0.01）；当猪原代前体脂肪细胞转染inhibitor时，miR-186-5p的表达量极显著降低（P < 0.01），细胞增殖能力以及增殖相关基因PCNA和CDK4的表达量、预测靶基因SIRT2的表达量都显著或极显著升高（P < 0.05、P < 0.01），而细胞成脂分化能力以及成脂分化相关基因PPARγ、SREBF1、C/EBPβ、FABP4、LPL的表达量都极显著降低（P < 0.01）。转染miR-186-5p mimics可以显著抑制SIRT2 3'UTR野生型双荧光素酶报告载体（SIRT2-Wt-psiCHECK-2）中荧光素酶的活性，但不影响SIRT2 3'UTR突变型双荧光素酶报告载体（SIRT2-Mut-psiCHECK-2）中荧光素酶的活性。miR-186-5p可以靶向结合SIRT2的3'UTR序列，降低SIRT2的表达，抑制马身猪原代前体脂肪细胞增殖，促进其成脂分化。