Construction of eukaryotic expression vector of congenital long QT syndrome related HERG gene A561V mutation and its expression in HEK293 cells

目的 在收集的一个先天性长QT综合征(congenital long QT syndrome, LQTS)家系中发现HERG基因A561V突变,探讨HERG基因A561V突变体及其真核表达载体的构建方法,并观察其在真核细胞中的表达.方法 采用克隆载体快速PCR法构建HERG基因A561V突变体PGEM-HERG-A561V,并应用限制性内切酶法将突变体构建到真核表达载体pcDNA3中,用Superfect转染试剂将野生型pcDNA3-HERG及pcDNA3-HERG-A561V突变体与荧光真核表达载体pRK5-GFP共转染至 HEK293细胞,用细胞免疫荧光化学法检测蛋白质表达.结果 构建的突变体经DNA直接测序示HERG基因cDNA1682位点碱基C变为T,构建的突变体在HEK293细胞中成功表达,其蛋白质位于细胞浆中及细胞膜上,而野生型基因的蛋白质位于细胞膜上.结论 用克隆载体快速PCR法构建并表达了HERG基因A561V突变, 为突变基因的进一步功能研究奠定了基础。