AVALIAÇÃO DA ANTIMUTAGENICIDADE DO ARTEPELIN C, IN VITRO, NO TESTE DE MICRONÚCLEOS COM BLOQUEIO DA CITOCINESE (CBMN)

Analises fitoquimicas identificaram o composto polifenolico Artepelin C (Art C - acido 3,5-diprenil-4-hidroxicinâmico) como principal componente bioativo da propolis verde. Devido ao fato de apresentar importantes atividades biologicas, este composto vem sendo alvo de diferentes estudos. Avaliar a modulacao de dano no DNA e de extrema importância, uma vez que, alguns compostos naturais podem atuar reduzindo ou removendo mutacoes espontâneas ou induzidas, propriedade conhecida como antimutagenicidade. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito protetor do Artepelin C contra instabilidade cromossomal induzida por um mutageno, utilizando o teste de micronucleos com bloqueio da citocinese, CBMN. Para tanto, as celulas de glioblastoma humano (U-87MG) foram cultivadas em monocamadas em frascos de cultura de 25 cm² (TPP), contendo meio DMEM suplementado com 15% de soro fetal bovino e antibioticos, a 37°C em uma incubadora com 5% de CO2. A bleomicina (BLEO) causa danos oxidativos no DNA e, dessa forma, foi utilizada como agente indutor de danos. Na avaliacao referente a antimutagenicidade as celulas foram semeadas em placas de cultura, incubadas por 24 horas com meio DMEM completo para entao serem submetidas a tres protocolos de tratamentos: pre- tratamento, onde as concentracoes 3,9; 7,8; 15,6; 31,2 e 62,5 μM de ArtC foram administradas antes da BLEO; tratamento simultâneo, Co- tratamento com diferentes concentracoes do ArtC e BLEO; pos tratamento, o ArtC foi administrado depois da BLEO. Apos a realizacao dos tratamentos, as celulas foram lavadas com DPBS e tripsinizadas com 350 μL de tripsina, neutralizadas com 650 μL de DMEM completo e transferidos 100 – 150 μL da suspensao de celulas para citocentrifuga de bancada, sendo centrifugadas a 700 xg por 5 min. A coloracao das lâminas foi realizada por panotico Instant Prov (Newprov®) e apos a secagem das mesmas, a leitura foi realizada em microscopia optica com aumento de 1000x, onde foram analisadas 1000 celulas binucleadas por concentracao para os parâmetros de micronucleos (MN), pontes nucleoplasmaticas (PN) e brotos nucleares (BR). Assim sendo, os resultados preliminares sugerem que o ArtC foi capaz de reduzir a frequencia de micronucleos em comparacao a celulas expostas a BLEO, nos tres protocolos de tratamento anteriormente citados, sugerindo que o Art C pode agir protegendo o DNA contra danos ou estimulando vias de reparo.