Elaboration de revêtements anti-aggrégatifs à l’aide de protéines chaperons

stockage de solution de proteines dans la duree. Afin de stabiliser ces solutions et d’eviter des phenomenes de denaturation au contact des surfaces et par consequent la perte d’activite biologique, des additifs ou stabilisants sont incorpores dans la formulation. Ces stabilisants, qui limitent les modifications de conformation, peuvent neanmoins presenter l’inconvenient d’etre injectes au patient en meme temps que le principe actif. Lorsque les proteines sont adsorbees sur des surfaces, elles subissent en effet de multiples modifications de conformation, qui peuvent non seulement provoquer une perte d’activite biologique mais egalement initier des phenomenes d’agregation (en particulier, en exposant les feuillets β initialement enfouis dans la structure de la proteine et favorisant par la meme occasion les interactions proteine-proteine plutot que proteine-solvant). L’intensite de la denaturation depend de la nature de la surface, du type de proteine mais aussi du temps de sejour au contact. Dans le milieu vivant, des proteines nommees « chaperons » ont pour but d’eviter ces changements de conformation trop drastiques, de maintenir les proteines d’interet dans leur conformation native et ainsi de bloquer le phenomene d’agregation. Nous proposons d’evaluer la possibilite de realiser des revetements avec une proteine chaperon et de maintenir son activite biologique. La proteine n’est alors plus libre dans la solution mais greffee de maniere covalente sur la surface, evitant ainsi le risque de relargage. Dans une premiere partie, la quantite de proteine chaperon necessaire pour limiter le phenomene d’agregation du lysozyme sur une duree de 48h est estimee. Pour cela, la fraction soluble de lysozyme en solution, les agregats solubles ainsi que les agregats adsorbes sont quantifies par spectroscopie UV. Dans un second temps, La proteine chaperon est greffee sur des substrats de titane et de verre afin de determiner son activite vis-a-vis de l’agregation du lysozyme. Nous avons pu montrer que la proteine greffee possede une activite comparable a la proteine en solution a 48h et que son efficacite se maintient sur une duree de 2 semaines.