Análisis cuantitativo de interacciones moleculares proteína-proteína mediante la combinación de microarreglos y un lector óptico basado en el fenómeno de resonancia de plasmones superficiales

La resonancia de plasmones superficiales (SPR) encuentra una aplicacion directa como sensor optico en la lectura de interacciones biomoleculares. En este trabajo empleamos un microscopio de resonancia de plasmones superficiales para la lectura simultanea y en tiempo real de interacciones proteina-proteina mediante su combinacion con microarreglos. La deteccion de dichos eventos moleculares se hacen sin necesidad de marcado fluorescente de la molecula bajo estudio. Los microarreglos fabricados contienen 144 elementos microscopicos activos de proteinas de (1) albumina de suero de humano HSA (0.1, 05, 1.0 mg/ml), (2) lisozima Lyz (0.1, 05, 1.0 mg/ml), (3) anti albumina de suero de bovino anti BSA (1.0 mg/ml) y (4) albumina de suero de bovino BSA (0.1, 05, 1.0 mg/ml). Determinamos simultaneamente las densidades de concentracion superficial de interaccion de anti albumina de suero de bovino a 1.0 mg/ml inyectada sobre los micrositios de proteinas previamente descritos, a traves de las curvas de cinetica de interaccion SPR. Encontramos que para concentraciones altas (1.0 mg/ml) de los micrositios impresos interactuando con solucion conteniendo anti BSA (1.0 mg/ml), la densidad de concentracion superficial de anti BSA anclada fue de 660 ng/cm 2 para BSA, 366 ng/cm 2 en el caso de HSA, 22.3 ng/cm 2 en Lyz y de 8.3 ng/cm 2 para anti BSA.