IRAK—M短发夹RNA对RAW264．7细胞内毒素耐受性的抑制作用

目的：观察白介素-1受体相关激酶-M（IRAK-M）基因沉寂后RAW264．7细胞内毒素耐受性的改变，进而探讨IRAK-M在内毒素耐受形成中的作用． 方法：构建表达IRAK—M短发夹RNA（shRNA）的阳性重组质粒（pshIRAK-M—A）和阴性重组质粒（pshIRAK-M—B），转染RAW264．7（小鼠单核巨噬细胞系）细胞：各组细胞经10μg／L脂多糖（LPS）预处理24h后（或直接）用100μg／L LPS刺激；3h后，酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养液中TNF-α水平，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中的TNF-αmRNA表达水平，蛋白印迹法（Western blotting）检测细胞中IRAK-M蛋白的表达，凝胶电迁移率分析法（EMSA）检测细胞中NF-κB的活性． 结果：pshIRAK-M-A对IRAK-M蛋白表达抑制率为83％左右，PshIRAK-M-B对IRAK-M蛋白表达无明显抑制作用：两种转染细胞在用100μg／L LPs直接刺激后，其培养液中TNF-α水平、细胞内TNF-αmRNA表达及NF—κB活性无显著性差异：两种转染细胞对LPS的再次应答均明显弱于初次应答细胞（P〈0．05），但pshIRAK-M-A转染组细胞对LPS的再次应答明显强于PshIRAK-M-B转染组细胞（P〈0．05）． 结论：IRAK—M表达受抑导致细胞内毒素耐受性减弱，IRAK—M在内毒素耐受形成中起重要作用．