Nup88-shRNA对人结肠癌细胞株HT-29生长及侵袭力影响的实验研究

目的构建重组慢病毒介导的Nup88-shRNA载体,由RNA干扰（RNAi）技术沉默Nup88,研究其对结肠癌HT-29细胞的增殖、黏附、侵袭和转移的影响,为结肠癌的临床基因治疗寻找新的靶点。方法 Nup88重组慢病毒载体的构建后包装检验效价,以最佳感染复数转染结肠癌HT-29细胞,实验分为沉默组、阴性对照组和空白组3组,其中沉默组分为Nup88-shRNA1、Nup88-shRNA2、Nup88-shRNA3、Nup88-shRNA4 4个亚组。通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot印迹检测各组表达效率,主要是HT-29细胞的mRNA和蛋白;四甲基偶氮唑盐（MTT）法和流式细胞术检测Nup88基因被干扰后对HT-29细胞增殖和凋亡的影响;细胞侵袭实验检测Nup88基因被干扰后对HT-29细胞侵袭力的影响。结果沉默4组病毒及1组阴性对照均构建成功,滴度均为4E＋8 TU/mL。沉默组Nup88 mRNA与阴性对照组和空白组相比,蛋白表达差异均有显著统计学意义（P〈0.01）。Nup88-shRNA1转染后,沉默率可达到86%。沉默组细胞增殖程度显著减少,与空白组和阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。沉默组细胞凋亡率（30.28%±0.19%）显著增加,与阴性对照组（4.15%±0.24%）和空白组（2.98%±0.27%）相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。培养肿瘤细胞常规24 h后,沉默组穿膜细胞数（120.5±8.7）和抑制率（49.22%）与阴性对照组（232.2±13.4,-2.14%）和空白组（276.4±10.2,0）相比,穿膜细胞数明显减少,抑制率明显增加,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 Nup88重组慢病毒可以通过RNAi成功抑制HT-29细胞中Nup88基因的表达,并能显著抑制其增殖及远处的侵袭能力。