p53 在苯并[a]芘诱导所致 p21 和细胞周期蛋白改变中的作用

目的探讨在苯并[a]芘（B[a]P）诱导的人胚肺成纤维细胞（HELF）中p53蛋白对p21、cyclinD1和CDK4蛋白间相互作用的影响。方法向转染p53小干扰RNA（p53siRNA）质粒的HELF细胞即p53．H细胞组、载体CMV的HELF细胞即HELF／CMV细胞组中分别加入2ixmol／LB[a]P作用24h，向p53化学抑制剂Pifithrin-α（PFT-α）组即HELF／CMV＋PFT．Ot细胞组中同时加入2μmol／LB[a]P和20μmol／LPFT-α作用24h，各组同时设立不做任何处理的对照组。用免疫印迹（Westernblot）法检测细胞中p53、p53-ser20以及p21、cyclinD1和CDK4蛋白水平的变化，同时利用免疫沉淀方法分析p53蛋白对p21、cyclinD1以及CDK4蛋白间相互作用的影响。结果利用PFT-α或p53siRNA技术抑制p53蛋白后，B[a]P诱导的p53蛋白20位丝氨酸磷酸化水平和p21蛋白水平的增高受抑制，B[a]P诱导的cyclinD1水平的增加不受影响，CDK4的水平不受B[a]P的影响；免疫沉淀实验结果表明，B[a]P引起的p21和CDK4结合的增加受到抑制，B[a]P引起的p21与cyclinD1结合的增加不受影响，cyclinD1和CDK4的结合不受B[a]P的影响。结论B[a]P通过p53-ser20影响人胚肺成纤维细胞p21和CDK4的结合。