慢病毒介导的GSK-3β基因稳定沉默表达的SH-SY5Y细胞系建立

目的构建靶向糖原合成激酶3β（GSK-3β）基因的RNA干扰慢病毒载体,建立其对GSK-3β基因沉默表达的人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）的细胞系模型。方法根据GSK-3βmRNA序列设计合成靶向目的基因的短发夹状RNA（shRNA）序列并构建慢病毒表达载体,经酶切和测序鉴定,将慢病毒重组载体与包装载体共转染293T细胞,获得纯化浓缩病毒液,侵染SH-SY5Y细胞,采用绿色荧光示踪观察细胞的转染情况,设为慢病毒干扰组（实验组）、阴性对照组（Lenti-NC组）、空白对照组（Blank组）,利用qRT-PCR和Western blot法检测GSK-3βmRNA和蛋白表达水平。结果成功构建了靶向GSK-3β的shRNA慢病毒,重组慢病毒转染人SH-SY5Y细胞,72 h后观察转染效率达90%以上,与对照组比较,靶基因变化结果显示,实验组中GSK-3βmRNA和蛋白的表达均显著降低（均P〈0.01）。结论有效建立慢病毒介导的GSK-3β基因稳定沉默表达的SH-SY5Y细胞模型,为体外评价研究GSK-3β沉默后药物或行为治疗AD提供试验工具细胞模型。