肝片形吸虫重组谷胱甘肽-S-转移酶对SD大鼠的免疫原性分析

目的分析肝片形吸虫重组谷胱甘肽-S-转移酶（FhGST）对SD大鼠的免疫原性。方法将已构建重组原核表达质粒pET30a-FhGST转化大肠埃希菌BL21（DE3）宿主菌，以异丙基-Bn硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达。十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析表达产物，蛋白质印迹（Western blotting）分析其免疫反应性。20只SD大鼠随机均分为蛋白免疫组和佐剂对照组，蛋白免疫组以纯化的重组蛋白皮下注射免疫SD大鼠，抗原免疫剂量为200μ/g（只·次），共免疫3次，每次间隔3周。佐剂对照组以PBS代替免疫抗原同法注射。免疫前、每次免疫后和末次免疫后3周、6周鼠尾采血，分离血清。利用间接ELISA法检测免疫大鼠血清IgG抗体水平的动态变化，噻唑兰法（MTF法）检测脾淋巴细胞增殖情况。结果经纯化获得重组FhGST蛋白，SDS-AGE电泳结果显示，在相对分子质量尬31300处出现单一条带。Westernblotting分析结果表明，纯化重组FhGST蛋白能识别自然感然肝片形吸虫的山羊阳性血清，在尬31300处可见特异的免疫反应带。重组FhGST蛋白免疫SD大鼠后，可诱导产生特异性IgG抗体，在免疫后第9周，抗体效价达到顶峰（1：89144），且明显高于佐剂对照组（1：1000）。重组蛋白能显著刺激大鼠脾细胞的生长和增殖。结论重组FhGST蛋白能诱导SD大鼠产生特异性免疫应答．具有良好的免疫原性。