Activateurs de couplage ameliores pour la synthese d'oligonucleotides

Procede de couplage de monomeres de phosphoramidite avec des nucleophiles, par exemple, le groupe 5'-hydroxyle sur la chaine d'oligonucleotides en croissance, au moyen d'un activateur de couplage qui est moins acide que tetrazole et au moins aussi nucleophile que tetrazole, et qui permet d'obtenir une efficacite de couplage comparable ou superieure a celle de tetrazole. Le pKa de cet activateur de couplage est situe entre 5 et 6, de preference, entre 5 et 5,5, et, dans un mode de realisation prefere, entre 5,1 et 5,3. Les activateurs de couplage appropries comprennent 4,5-dicyanoimidazole (DCI), 4-alkylthioimidazole, 2-alkylthioimidazole, 2-nitroimidazole, 4-nitroimidazole, 4,5-dihaloimidazole, 4-haloimidazole, 2-haloimidazole et 5-alkoxytetrazole. DCI est l'activateur de couplage emportant la preference. Dans un autre mode de realisation, on peut utiliser une combinaison d'un activateur de couplage acide et un tampon approprie, tel qu'une amine tertiaire. Cette amine tertiaire peut etre une amine tertiaire comportant trois groupes alkyle ou un compose heterocyclique contenant une ou plusieurs amines tertiaires. Cette amine tertiaire est, de preference, moins nucleophile que DMAP, dont on sait qu'il provoque des reactions secondaires au niveau de l'oxygene en position 6 de guanosines a cause de son caractere nucleophile relativement fort. N-methylimidazole (NMI) est l'amine tertiaire preferee.