过表达 NR 4A1促进山羊皮下脂肪细胞分化

旨在克隆山羊NR4A1基因的CDS区序列，明确其组织和细胞表达模式，以及探究过表达NR4A1基因对山羊皮下脂肪细胞分化的影响。本试验利用双酶切法构建山羊过表达载体pcDNA3.1-NR4A1。以1周岁简州大耳羊（n=5）为试验动物。利用RT-PCR方法和实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）技术克隆NR4A1基因编码区序列并明确其时空表达特性，再将山羊pcDNA3.1-NR4A1载体转染皮下脂肪细胞使NR4A1过表达，利用形态学方法检测过表达后脂滴聚集的变化，同时采用qPCR方法检测脂肪分化标志基因相对表达水平的变化。结果获得山羊NR4A1基因的编码区序列是1 797 bp，编码598个氨基酸；NR4A1在山羊各组织中广泛表达，且在山羊背最长肌中的相对表达水平最高（P < 0.01），在山羊皮下脂肪细胞分化60 h表达量最高（P < 0.01）；过表达NR4A1基因显著促进山羊皮下脂肪细胞的脂滴积累，并且显著提高C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ、LPL、SREBP1和AP2的相对表达水平（P < 0.05）。NR4A1基因可能是山羊皮下脂肪细胞分化的正调控因子，且可能是协同脂肪分化标志基因的表达量来实现的。