Construction of the eukaryotic expression vector carrying rat GLUT3 gene and its expression in 293 cells

目的 构建大鼠葡萄糖转运体3(GLUT3)的真核表达载体,为进一步研究葡萄糖转运体3对缺血缺氧脑细胞的保护作用奠定基础.方法以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法从大鼠脑组织中获取GLUT3全长cDNA片段,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Glut3,随后用LipofectamineTM2000介导转染HEK293细胞,以RT-PCR的方法检测重组质粒在mRNA水平的表达,以免疫组织化学的方法检测重组质粒在蛋白水平的表达.结果克隆的大鼠GLUT3全长cDNA大小约1.5kb且无碱基突变,以构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Glut3转染293细胞后,在基因及蛋白表达水平均检测到了葡萄糖转运体3的表达.结论成功构建了携带大鼠葡萄糖转运体3的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Glut3,且证实其可在293细胞中成功表达目的基因。