Hg^2＋诱导发光报告基因系统的构建及其检测红壤中残汞的研究

将汞诱导型启动子PmerT和其调控基因merR与egfp基因融合构建发光报告基因系统.通过mini-Tn5系统把merR-egfp插入到Pseudomonas putida染色体DNA上,构建成为在Hg2＋诱导下能特异性表达绿色荧光蛋白的工程菌,并将其应用于检测江西红壤中汞污染.当土壤中汞含量在0.04～50 mg.kg-1范围内时,采用流式细胞仪测定工程菌表达的荧光强度,发现荧光强度与汞污染的含量呈正相关,且最低检测含量为0.04 mg.kg-1.土壤背景中一定含量的Cr2＋、Zn2＋、Co2＋、Cu2＋、Pb2＋、Ag＋对汞污染测定均无显著影响.正交试验结果表明,孵育温度是影响荧光测定的主要因素,其最佳范围为30～35℃.将初始含量为0.1 mg.kg-1的Hg2＋添加入江西红壤并孵育15和30d后,运用原子吸收和工程菌分别对残汞进行检测,结果显示工程菌对可溶性残汞、生物质残汞、有机残汞和剩余残汞均有响应,有效检出35%～64%,其有效性限与传统分析方法一致.