The determination of epitope relating to BAC5 McAb using random peptide library (PRL)

目的鉴定能被BAC5单抗识别的定位于鼻咽癌细胞表面的抗原表位。方法应用BAC5单抗作为靶抗体对噬菌体展示的随机12肽文库进行3轮生物淘洗，用抗体捕获和竞争试验的夹心ELISA方法选择和鉴定阳性噬菌体克隆，对阳性和阴性噬菌体的外源性DNA片段进行序列分析，推导和比较由这些噬菌体所展示的多肽的氨基酸序列。结果通过3轮生物淘洗能被抗体捕获的噬菌体克隆为77% (35/45)。用竞争试验从所捕获的克隆中测得8个阳性克隆。来自这8个克隆的噬菌体展示3种外源多肽，即-H-Q-S-H-Y-P-Y-P-V-V-S-L-(4/8)，-Q-N-Q-A-W-F-S-Q-P-P-V-R-M-(3/8)和-T-Q-A-Y-K-G-F-P-V-L-P-S-(1/8)，与来自阴性克隆的多肽序列-N-H-Q-S-T-F-W-Q-K-W-T-A-(6/6)比较，前3个序列在靠近肽的N端都具有相同的脯氨酸(P)和缬氨酸(V)结构(-P-V-)。结论 BAC5单抗能识别近N端含有脯氨酸和缬氨酸结构的多肽。这些多肽可能模拟存在于鼻咽癌细胞表面，与BAC5单抗相关的抗原表位的构象。