多响应曲面优化-毛细管电泳-激光诱导荧光快速检测食源性致病菌

建立了食品中常见致病菌：沙门菌的invA基因、大肠杆菌0157：H7的rfbo157基因、志贺菌的ipaH基因及副溶血性弧菌Vpara（16S-23SrDNAIGS）基因的多重PCR产物-毛细管电泳快速检测方法．根据沙门菌、大肠杆菌O157：H7、志贺菌及副溶血性弧菌的特异性基因保守序列设计出多重PCR引物，优化PCR扩增反应体系．采用多响应曲面法优化毛细管电泳的分离条件，以含有DNA荧光染料SYBR Green I的1．0％甲基纤维素为筛分介质，通过毛细管电泳-激光诱导荧光同时检测4种常见致病菌的PCR扩增产物．在优化的多重PCR反应体系和毛细管筛分电泳条件下，此方法可以同时检测出沙门菌的invA基因、大肠杆菌O157：H7的rfbO157基因、志贺菌的ipaH基因及副溶血性弧菌Vpara（16S-23SrDNA IGS）基因的多重PCR扩增产物，25min内即可完成检测．迁移时间的日内相对标准偏差为0．92％～1．58％．通过多响应曲面的优化，有效改善了毛细管电泳对DNA分子的分离能力．