Trace Level Determination of Domoic Acid in Seawater by Off-line/on-line Solid-phase Extraction Coupled to HPLC-UV

Domoic acid (DA) is a marine neurotoxin mainly produced by microalgae of the genus Pseudo-nitzschia and is considered the main responsible for a human intoxication syndrome known as amne- sic shellfish poisoning. In this work, a method for the determination of the biotoxin at low ppb or sub-ppb concentration levels in seawa- ter was developed based on a double solid-phase extraction (SPE) followed by on-line transfer and HPLC-UV analysis of the whole extract. First, preconcentration of DA from 100-mL sample volumes and convenient sample cleanup is achieved by off-line SPE on a re- versed phase C18 cartridge. Then, the extract is diluted and loaded in a polymeric reversed phase precolumn, which is further on-line eluted and analyzed. A critical condition for retaining the hydrophilic analyte in the cartridge or the precolumn is the addition of acid and an ion pairing reagent to the loading solution. Recoveries exceeded 90% for all tested seawater samples spiked with DA at 0.5-1 ng/mL. Good precision (<5%) and a limit of detection of 0.04 ng/mL were obtained with this simple method that only requires the use of conventional instrumentation existing in most analytical laboratories in Mexico. Resumen. El acido domoico (AD) es una neurotoxina marina produ- cida principalmente por microalgas del genero Pseudo-nitzschia y es considerado como principal responsable del sindrome de intoxicacion humana conocido como envenenamiento amnesico por moluscos. En este trabajo se desarrollo un metodo para la determinacion de la bio- toxina a niveles de concentracion de ppb o sub-ppb en agua de mar. El metodo esta basado en una doble extraccion en fase solida (EFS) seguida por la transferencia en linea y el analisis del extracto completo por CLAR-UV. Primero, mediante una EFS fuera de linea en cartuchos de fase reversa C18 se logra la preconcentracion del AD a partir de 100 mL de muestra y una conveniente eliminacion de impurezas. Pos- teriormente, el extracto se diluye y se carga en una precolumna de fase reversa polimerica, la cual se eluye y analiza en linea. Una condicion indispensable para la retencion del analito hidrofilico en el cartucho y la precolumna es la adicion de acido y de un agente formador de pares de iones a la solucion de carga. Las recuperaciones obtenidas en el analisis de diferentes muestras de agua de mar, fortificadas con AD a concentraciones de 0.5-1 ng/mL, fueron mayores al 90%. Con este metodo simple, que solo requiere de instrumentacion convencional con la que cuentan la mayoria de los laboratorios analiticos en Mexi- co, se obtiene una buena precision (<5%) y un limite de deteccion de 0.04 ng/mL. Palabras clave: acido domoico, agua de mar, extraccion en fase soli- da, analisis por CLAR-UV.