HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体构建及其基因工程菌种稳定性的鉴定

目的构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt—tBid的原核表达载体并鉴定其基因工程菌种稳定性。方法应用PCR技术以pCMV-e23sFv—Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段，并将其克隆入pET-22b原核表达载体；将该表达载体转化BL21大肠杆菌并挑取表达蛋白较高的克隆菌，划线接种传代50次；通过革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及蛋白诱导表达的Westernblot分析鉴定e23sFv-Fdt-tBid免疫促凋亡蛋白表达工程菌的稳定性。结果成功构建pET-22b-e23sFv-Fdt—tBid原核表达载体，并在BL21大肠杆菌中诱导表达；革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及Westernblot法鉴定结果表明基因工程菌种稳定性良好，可以稳定表达免疫促凋亡蛋白e23sFv—Fdt—tBid。结论成功构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白原核表达载体，鉴定了表达该免疫促凋亡蛋白的基因工程菌种稳定性，为HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的应用研究奠定了基础。